ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
　　
　　ELISA試劑盒的影響因素應選用質量靠得住的產品，不能圖便宜，忽視質量保證。試劑應妥善保存于4℃冰箱內，在使用時先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內用完，剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導致錯誤結果。
　　
　　ELISA試劑盒注意事項：
　　
　　1．ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
　　
　　2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
　　
　　3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
　　
　　4．請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
　　
　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　
　　6．底物請避光保存。
　　
　　7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
　　
　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
　　
　　9．本試劑不同批號組分不得混用。
　　
　　10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。