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細胞凋亡檢測的幾種方法介紹
更新時間:2019-08-27 點擊次數:1344次
 
  
  人體內的細胞注定是要死亡的,有些死亡是生理性的,有些死亡則是病理性的,有關細胞死亡過程的研究,已成為生物學、醫學研究的一個熱點。人們已經知道細胞的死亡起碼有兩種方式,即細胞壞死與細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死是早已被認識到的一種細胞死亡方式,而細胞凋亡則是逐漸被認識的一種細胞死亡方式。
  
  細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象,在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型,而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。
  
  幾種細胞凋亡檢測方法:
  
  一、形態學觀察方法
  
  1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現象。
  
  2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。
  
  3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區別壞死細胞有一定的幫助。
  
  4、透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質緊實,細胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現象。
  
  二、DNA凝膠電泳
  
  (一)檢測原理
  
  細胞發生凋亡或壞死,其細胞DNA均發生斷裂,細胞內小分子量DNA片斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規律的發生在核小體之間,出現180-200bpDNA片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區別。
  
  (二)結果判斷
  
  正常活細胞DNA電泳出現階梯狀(LADDER)條帶;壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續性條帶。
  
  三、酶聯免疫吸附法(ELISA)核小體測定
  
  凋亡細胞的DNA斷裂使細胞質內出現核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片斷組成,可由ELISA法檢測。
  
  四、流式細胞儀定量分析
  
  檢測原理
  
  細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常細胞與壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞核凋亡細胞。
  
  
  
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