蛋白質印跡法是由瑞士*弗雷德里希生物研究所（FriedrichMiescherInstitute）的HarryTowbin在1979年提出的。在尼爾·伯奈特（NealBurnette）于1981年所著的《分析生物化學》（AnalyticalBiochemistry）中被稱為Western Blot。

　　

　　蛋白免疫印跡即Western Blot，是將印跡技術與抗原-抗體反應的特異性相結合的檢測技術，用于分離和檢測生物標本中的某一特定蛋白。其基本原理實混合蛋白質樣本通過凝膠電泳分離后，通過特殊虹吸或電場裝置印跡至固相介質（NC膜或PVDF膜）上，將針對待測蛋白的特異性抗體作用于濾膜上，利用抗體上偶聯的酶降解底物在濾膜上生成有色沉淀物或化學發光產物，從而顯示出待測蛋白的存在及量。

　　

　　在Western Blot中使用內參其實就是在WB過程中另外用內參對應的抗體檢測內參，這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達，由于內參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內參的量就可以用于校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差，保證實驗結果的準確性。此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否*、整個Western Blot顯色或者發光體系是否正常。

　　

　　操作程序：

　　

　　1．總蛋白制備；

　　

　　2．比色法測定蛋白含量；

　　

　　3．變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE)凝膠電泳，分離蛋白質；

　　

　　4．蛋白質轉印電泳印跡法；

　　

　　5．固相免疫檢測：封閉、一抗雜交、二抗雜交；

　　

　　6．化學發光法檢測：顯色、曝光、顯影定影；

　　

　　7．結果數據分析：膠片掃描，軟件分析；

　　

　　8．提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關圖表。